新國標GB/T 5750-2023擴項，為何我做的丙烯酰胺回收率這么低！Anavo產品來幫忙

丙烯酰胺作為具有神經、生殖、發育毒性，容易致癌，已被國家癌癥中心 (IARC)列為ⅡA類致癌物，在最新頒布的GB/T 5750-2023《生活飲用水標準檢驗方法》對丙烯酰胺的測定方法進行了拓展，在2006版氣相色譜法的基礎上，新增了高效液相色譜串聯質譜法。

GB/T 5750.8-2023 (13)丙烯酰胺的測定，第一法（新增高效液相色譜串聯質譜法）相比第二法（氣相色譜法）的優勢：

? 高效液相色譜串聯質譜法與氣相色譜法相比，采用活性炭固相萃取柱進行樣品富集、凈化，代替傳統的液液萃取方式。

? 其次，無需樣品的溴化反應過程，減少了硫酸等復雜溶劑的使用。

基于以上液質法的優勢，新國標GB/T 5750-2023擴項過程中，越來越多的檢測工作者采用了新增的液質法進行飲用水中丙烯酰胺的測定。不過，我們收到很多檢測工作者的反饋，在擴項過程中遇到了以下挑戰：

挑戰1：由于丙烯酰胺的強極性，目前市面上提供的大部分前處理產品（包括進口），在大量上樣后出現了丙烯酰胺的穿透現象，在小柱上幾乎沒有保留。因此，從水中萃取丙烯酰胺存在較大挑戰。

挑戰2：由于丙烯酰胺易溶于水，屬強極性化合物，在傳統的反相色譜柱上保留較弱。

納鷗科技技術團隊，采用Anavo AC SPE小柱作為萃取填料（500 mg/6 mL ,PN: AN60C059）凈化和富集水樣，對水中的高極性化合物丙烯酰胺具有極強的吸附能力。在色譜分離方面，使用Anavo HSS T3色譜柱（2.1*50 mm, 1.8 μm，PN：AN80A058），對丙烯酰胺具有優異分離效果。

Anavo AC SPE小柱前處理過程：

前處理過程關鍵點&注意事項：

（1）在SPE裝置上用截止閥（考克）控制流速，1滴/秒或者3滴/2秒。

（2）甲醇洗脫的時候慢一點，控制流速，0.5-1 mL/min洗脫液收集后加入1 mL水，40 ℃下緩慢通入氮氣吹至約1 mL，再上機。

結果表明, 丙烯酰胺加標濃度0.05 μg/L，回收率96.6% ~106.0%，相對標準偏差RSD=3.7%；丙烯酰胺加標濃度0.1 μg/L，回收率94.7% ~102.9%，相對標準偏差RSD=3.0%；丙烯酰胺加標濃度0.5 μg/L，回收率96.5% ~103.8%，相對標準偏差RSD=2.3%。

生活飲用水中丙烯酰胺測定

1 方法原理

水樣通過活性炭固相萃取柱凈化和富集，甲醇洗脫液經濃縮、定容和過濾后，采用液相色譜分離，串聯質譜檢測，同位素內標法定量。取100 mL水樣經提取后定容至1.0 mL測定，最低檢測質量濃度為0.02 μg/L。

1.1試劑、材料和儀器設備

1.1.1 甲醇：（色譜純 納鷗科技）

1.1.2甲酸：（色譜純 Aladdin公司）

1.1.3 標準溶液：甲醇中的丙烯酰胺標準溶液（DRE-A10045300ME- 100，德國Dr.E公司，濃度100 mg/L）；丙酮中13C3-丙烯酰胺標準溶液（20128XB，曼哈格公司，濃度100 mg/L）。

1.1.4 固相萃取柱：（AC小柱 500 mg 6 mL，納鷗科技，PN：AN60C059）

1.1.5 水系微孔濾膜：（RC再生纖維素濾膜 0.22 μm，納鷗科技，PN：AN40A025）

1.1.6 液相色譜-質譜聯用儀（美國waters公司液相色譜質譜聯用儀TQ-XS）。

1.1.7 Milli-Q超純水系統（美國Millipore公司）

1.1.8 氮氣吹干儀（瑞典Biotage公司）

1.1.9 液相色譜柱（Anavo HSS T3色譜柱：2.1*50 mm, 1.8 μm , 納鷗科技，PN：AN80A058）

1.2 分析步驟

1.2.1 樣品采集

使用棕色玻璃瓶采集水樣，水樣充滿樣品瓶并加蓋密封，避光0 ℃～4 ℃冷藏保存，保存時間為48 h。

1.2.2 水樣的前處理

用5 mL甲醇及5 mL水活化固相萃取柱。取100 mL水樣，加入50 μL質量濃度為100 μg/L丙烯酰胺13C3內標使用液，混勻，內標物在水中的質量濃度為0.05 μg/L。水樣以1 mL/min過富集柱。用氮氣吹2 min，使固相萃取柱干燥，之后用10 mL甲醇洗脫到試管中。洗脫液收集后加入1 mL水，于40 ℃下用氮氣吹至1 mL，微孔濾膜過濾，供儀器測定。

1.2.3 標準溶液的配制

1.2.3.1 丙烯酰胺標準中間液：準確移取丙烯酰胺標準溶液（2.2.3）1 mL 至10 mL容量瓶中，用甲醇定容，濃度為10 mg/L。

1.2.3.2 丙烯酰胺標準使用液：準確移取標準中間液（2.3.2.1）1 mL至100 mL容量瓶中，用純水定容，濃度為100 μg/L。

1.2.3.3 13C3-丙烯酰胺內標中間液：準確移取13C3-丙烯酰胺內標溶液（2.2.3）1 mL至10 mL容量瓶中，用甲醇定容，濃度為10 mg/L。

1.2.3.4 13C3-丙烯酰胺內標使用液：準確移取13C3-丙烯酰胺內標中間液（2.3.2.3）1 mL至100 mL容量瓶中，用純水定容，濃度為100 μg/L。

1.2.3.5 標準系列：丙烯酰胺標準使用液（2.3.2.2）以純水逐級稀釋，配制得到 2 μg/L、5 μg/L、10 μg/L、20 μg/L、50 μg/L的標準工作液系列。每個濃度的標曲樣品加入固定濃度5 μg/L的13C3-丙烯酰胺。

1.2.4 數據處理  

式中：

r——水樣中丙烯酰胺的質量濃度，單位為毫克每升（mg/L）;

r1——從標準曲線上得到的丙烯酰胺的質量濃度，單位為微克每升（μg/L）；

V1——樣品溶液上機前定容體積，單位為毫升（mL）；

V2——樣品溶液所代表試樣的體積，數值為100，單位為毫升（mL）；

1000——毫克每升與微克每升的換算系數。

2 實驗結果

2.1 定量限和試劑空白

以信噪比（S/N=10）確定目標組分定量限。將2 μg/L的標準溶液按標準方法規定步驟測定。對比試劑空白（超純水）色譜出峰情況，對目標組分無顯著干擾。由于樣品經過100倍的富集，由此確定丙烯酰胺的定量限為0.020 μg/L。

2.2 標準曲線

以丙烯酰胺的質量濃度為橫坐標，以丙烯酰胺峰面積與內標峰面積的比值為縱坐標，繪制擬合曲線。丙烯酰胺的擬合曲線方程y=0.524254x+0.430776（r=0.9995）。

2.4回收率和精密度

采用末梢水樣品進行加標回收（0.05 μg/L, 0.1 μg/L和0.5 μg/L）和精密度（n=7）實驗。結果表明, 丙烯酰胺加標濃度0.05 μg/L，回收率96.6% ~106.0%，相對標準偏差RSD=3.7%；丙烯酰胺加標濃度0.1 μg/L，回收率94.7% ~102.9%，相對標準偏差RSD=3.0%；丙烯酰胺加標濃度0.5 μg/L，回收率96.5% ~103.8%，相對標準偏差RSD=2.3%；

表1末梢水樣品加標回收率及精密度實驗結果（n=7）

3.典型譜圖

水樣凈化后質譜圖（加標濃度0.5 μg/L）

水樣凈化后質譜圖（加標濃度0.1 μg/L）

水樣凈化后質譜圖（加標濃度0.05 μg/L）

丙烯酰胺測定關鍵耗材丙烯酰胺測定關鍵耗材

GB 5750-2023納鷗科技配套耗材